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LABORATÓRIO DE GENÉTICA
Diretora da Unidade:Ruth Camargo Vassão, PhD, PqC-V
Pesquisadores da Unidade:Adriana Costa Neves, PhD, PqC-I
Alexandre Pereira, MD, PqC-III
Aurora Marques Cianciarullo, PhD, PqC-III
Edécio Armbruster de Moraes, PhD, biologista
Itamar Romano Garcia Ruiz, PhD, PqC-VI
Maria José de Jesus Silva, PhD, PqC-I
Mario Gustavo Mayer, MD, PqC-II
Oilita Pereira Ferraz, Assistente Técnica de Pesquisa VI
Olga Brunner, Assistente Técnica de Pesquisa III
Rita de Cassia Stocco dos Santos, PhD, PqC-VI
Suely Lucia Muro Rais Assaf, Médica
Liderança Científica:Willy Beçak, PhD
Pesquisadores Associados:Antonio Carlos Freitas, PhD, Professor Adjunto Departamento de Genética-UFPE
LABORATÓRIO DE GENÉTICA
1. Genética molecular de tumores cutâneos e de mucosas
A pele é o maior órgão do corpo humano, estando sujeita à ação de inúmeros agentes externos capazes de gerar lesões que podem tornar-se malignas. A radiação ultravioleta, em particular, é responsável pelo desenvolvimento de diferentes tipos de tumores sólidos. Dentre estes, o melanoma e os carcinomas basocelular e espinocelular estão sendo estudados visando a caracterização molecular e comparação do ponto de vista da diferente habilidade desses tumores em gerar metástases. O estudo é pareado entre biópsias tumorais, e tecidos normais correspondentes, visando a expressão de genes relacionados à adesão celular e genes ligados ao controle do ciclo celular. Outros estudos referentes a alterações no DNA repetitivo como os microssatélites visam à obtenção de marcadores genéticos moleculares que poderão ser aplicados em diagnóstico e prognóstico na clínica médica.
2. Pesquisas em vírus de papiloma humano (HPV) e bovino (BPV) e desenvolvimento de vacinas
A infecção por certos HPV ( Human Papiloma Vírus) representa o maior fator de risco para o desenvolvimento de câncer anogenital, sendo o principal agente etiológico desta doença sexualmente transmissível. O câncer cervical atinge cerca de 450 mil mulheres por ano no mundo, levando a óbito aproximadamente a metade delas. As vias endocíticas celulares são utilizadas por muitas famílias virais para infectar células hospedeiras para replicação. A hipótese de o HPV infectar leucócitos do sangue periférico tornaria o contato com sangue contaminado uma via de propagação da doença, atualmente não considerada. A análise de possíveis vias alternativas de infecção pelo HPV, as conseqüências para o organismo, como a oncogênese, e a compreensão dos mecanismos envolvidos no processo, auxiliarão no desenvolvimento de formas de combate à doença.
Devido ao sinergismo entre oncoproteínas do BPV ( Bovine Papiloma Vírus) e quercetina , proveniente da samambaia Pteridium aquilinum , faz-se análise citogenética em cultura de linfócitos de pacientes e bovinos consumidores dessa samambaia. Outros projetos relacionados têm como objetivo o desenvolvimento de vacinas baseadas na tecnologia do DNA recombinante (v-DNA) e partículas virais (VLP); o estudo de sistemas de expressão e modelos animais para teste; a detecção da presença de BPV em lesões cutâneas; a transmissão materno-fetal. Além disso, serão desenvolvidos projetos sobre análise citogenética e avaliação de seqüências de HPV em culturas primárias de carcinomas epidermóides, orais e de orofaringe, e detecção de subtipos desses vírus em mucosa oral e de colo uterino de mulheres submetidas à citologia exfoliativa cervical.
3. Efeito de toxinas de venenos ofídicos sobre células tumorais e seu uso como moléculas transportadoras
Culturas de melanoma humano e murino estão sendo realizadas com objetivo de testar os efeitos in vitro na morfologia, adesão, migração e invasão celular induzidos pela toxina ofídica jararagina, isolada de Bothrops jararaca . Camundongos portadores de melanoma estão sendo tratados com doses subtóxicas de jararagina visando a redução do número de metástases.
Uma nova estratégia para o transporte de moléculas como DNA, e proteínas para o interior de diferentes tipos de células, in vitro e in vivo , também está sendo desenvolvida, usando como vetor a toxina crotamina, isolada do veneno de Crotalus durissus terrificus .
4. Pesquisas com células tronco
Estão sendo implantados protocolos para isolamento, estabelecimento, manipulação, caracterização e diferenciação de células tronco pluripotentes embrionárias de camundongo, e células tronco adultas humanas, de diferentes tecidos in vitro e in vivo .
5. Estudos citogenéticos e moleculares em vertebrados
Quanto à citogenética, regulação gênica e genética molecular de vertebrados, vários projetos têm sido realizados. Entre eles, o estudo do pareamento somático e endomitose em células pré-meióticas, e aberrações cromossômicas em serpentes Viperidae e Colubridae . A regulação gênica e evolução foram exaustivamente estudadas em serpentes e anfíbios poliplóides, tanto do ponto de vista citogenético, como molecular.
O estudo da fauna de pequenos vertebrados exige colaboração estreita entre citogenética, sistemática - tradicional e molecular - e biogeografia, buscando acessar a real biodiversidade brasileira, sua constituição cromossômica, gênica, relações filogenéticas e história evolutiva. Problemas de evolução cromossômica têm sido equacionados, contribuindo para a citotaxonomia de diversos grupos, uma vez que o cariótipo representa um marcador fundamental, especialmente no caso de espécies crípticas. Além disso, o seqüenciamento de DNA mitocondrial e nuclear também têm contribuído na sistemática molecular, permitindo acessar a biodiversidade, inferir reconstrução filogenética e filogeografia de vários grupos de vertebrados.
6. Metabolismo do ferro celular para síntese do heme
O elemento ferro é essencial para a vida como catalisador dos sistemas de oxidação-redução e bioenergéticos. Entretanto, o ferro participa na formação de radicais livres tóxicos capazes de comprometer todas as moléculas biológicas. Portanto, há moléculas especializadas na aquisição, transporte e armazenamento do ferro celular numa forma solúvel não tóxica. A síntese do heme em células eritrocitárias é dependente do ferro da transferrina, cuja internalização ocorre através do receptor específico CD71, mediada por clatrina em vesículas endocíticas. Defeitos no metabolismo do ferro desencadeiam inúmeros processos patológicos em humanos, sendo ainda insuficiente o conhecimento relativo ao tráfico intracelular do heme e a integração das hemoproteínas. O objetivo deste estudo é elucidar aspectos relacionados com a síntese do heme mitocondrial e bacteriano.
8. Processamento de RNA em tripanossomatídeos
Estudos dos mecanismos de trans-splicing em eucariotos vem sendo conduzidos utilizando tripanossomatídeos como modelo. Os tripanossomatídeos são eucariotos que divergiram evolutivamente há muito tempo, sendo causadores de doenças que podem causar sofrimento e até morte de pessoas. Esses organismos possuem características biológicas distintas quando comparados a outros eucariotos, incluindo-se mecanismos particulares para a regulação da expressão gênica. Os genes codificadores de proteínas são transcritos como unidades policistrônicas, que são processadas por trans-splicing e poliadenilação para a geração de mRNAs maduros. Está sendo desenvolvido estudo dos mecanismos de trans-splicing , com interesse especial na determinação de novos substratos para esse tipo de processamento.
ARTIGOS E CAPÍTULOS DE LIVROS PUBLICADOS
2002-2005
• Almeida TMB, Leitão RG, Andrade S, Beçak W, Carvalho FC, Sonohara S. 2004. Detection of micronuclei formation and broken eggs in regenerative nodules of human cirrhotic livers and relationship to hepatocellular carcinoma. Cancer Genet. Cytog. 150:16-21.
• Álvares LE, Polanco C, Brison O, Coutinho LL, Ruiz IRG, 2002. Molecular evolution of ribosomal intergenic spacers in Odontophrynus americanus 2n and 4n (Amphibia, Anura). Genome 45: 71-81.
• Álvares LE, Wuyts J, Peer YV, Silva EP, Coutinho LL, Brison O, Ruiz IRG, 2004. The 18S rRNA from Odontophrynus americanus 2n and 4n (Amphibia, Anura) reveals unusual extra-sequences in the variable region V2. Genome 47 (3): 421-428.
• Beçak ML, Beçak W, Pereira A, 2003. Somatic pairing, endomitosis and chromosome aberrations in snakes. An Acad Bras Ciências 75(3): 1-16.
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• Moraes EA. Pré-Natal: Diagnóstico em Obstetrícia- Genética, pág. 244-258. Editor: Sérgio Peixoto. Editora Rocca , São Paulo, 2004.
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• Stocco dos Santos RC, Castro NH, Lillia Holmes A, Beçak W, Tackelshorne D, Lindsey CJ, Lubs HÁ, Stevenson RE, Schwartz CE, 2003. Stocco dos Santos X-linked mental retardation syndrome:clinical elucidation and localization to Xp11.3-Xq21.3. Am J Med Genet 118A (3): 255-259.
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• Turatti E, Neves AC, Magalhães MHCH, Sousa SCOM, 2005. Assessment of c-jun, c-fos and cyclin D1 in premalignannt and malignant oral lesions. J Oral Sci 47(2): 71-76.
• Vassão RC, Consales CA, Sant Anna OA, Pereira CA, 2003. Antibody responsiveness during immunization and challenge of genetically modified antibody responder mice with murine hepatitis virus 3. Immunobiol., 207: 275-283.
• Ventura K, Silva MJJ, Fagundes V, Yonenaga-Yassuda Y, 2004. An undescribed karyotype for Thaptomys (2n=50) and the mechanism of differentiation from Thaptomys nigrita (2n=52) evidenced by FISH and Ag-NORs. Caryologia 57(1): 89-97.
TESES, DISSERTAÇÕES E MONOGRAFIAS (trabalhos de conclusão de curso) de 2002-2005
• Adriana C. Neves doutorado
Comparação da expressão imunoistoquímica do p21 com alterações nos exons 2 e 3 do gene WAF1 em carcinomas epidermóides de boca . Fac. Odontologia, USP, 2004. Orientadora: Dra. Suzana C.O. M. de Sousa.
• Adriana Mari Orimoto mestrado
Estudo da expressão de genes integrinas e metaloproteinase em tumores cutâneos com diferentes potenciais de metastatização . Instituto de Biociências, USP, julho 2003. Orientadora: Dra. Itamar R.G. Ruiz.
• Aline Medeiros Leal - mestrado
Caracterização citogenética de linhagens estabelecidas de fibroblastos de palato de bovino transfectadas com seqüências do genoma do vírus do papiloma bovino tipo 4 e submetidas a tratamento com quercetina . Instituto de Ciências Biomédicas, USP, novembro 2003. Orientadora: Dra. Rita de Cassia Stocco dos Santos.
• Claudemir de Carvalho doutorado
Análise da detecção de seqüências genômicas dos vírus do papiloma bovino tipos 1, 2 e 4 em segmentos do trato reprodutivo de fêmeas e machos bovinos e gametas . Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, USP, abril de 2003. Orientadora: Dra. Rita de Cassia Stocco dos Santos.
• Daniela Cristina da Costa Santos - mestrado
Estudo de mutações nos genes PTCH e de microssatélites em pacientes portadores de carcinoma basocelular esporádico e síndrome de Gorlin . IB-UNESP Rio Claro, fevereiro 2003. Orientadora: Dra. Itamar R.G. Ruiz.
• Gil Rodrigo Harnon Ribeiro mestrado
Instabilidade do genoma, mutação/expressão gênica e tumorigenicidade de linhagens de carcinoma de cólon humano antes e após tratamento com toxina ofídica. Instituto de Biociências, UNESP Rio Claro, setembro 2003. Orientadora: Dra. Itamar R.G. Ruiz.
• Guilherme Francisco TCC
Estudo de mutações no exon 7 do gene TP53 e instabilidade genômica geral em pacientes portadores de carcinoma basocelular . Instituto de Biociências, UNESP Rio Claro, janeiro 2005. Orientadora: Dra. Itamar R.G. Ruiz.
• Luiz Gustavo Bentim Góes mestrado
Expressão heteróloga do gene L1 do vírus do papiloma humano tipo 16 e bovino tipo 4 em células S2 de Drosophila melanogaster: estudos preliminares para obtenção de vírus-like particles . Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), julho 2005. Orientadora: Dra. Rita de Cassia Stocco dos Santos.
• Mario Gustavo Mayer mestrado
Mecanismos do processamento de RNA por splicing: uma revisão crítica do estado atual . Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), julho 2003. Orientadora: Dra. Lucile Maria Floeter Winter.
• Miguel Golono mestrado
Variantes moleculares do vírus influenza . Instituto de Biociências, USP, 2004. Orientador: Dr. Willy Beçak.
