LABORATÓRIO DE IMUNOLOGIA VIRAL



Chefe da Unidade:

Pereira, Carlos Augusto, PqC-VI, Doutor



Pesquisadores da Unidade:

Astray, R.M. - Farmacêutico    

Mendonça, Ronaldo Zucatelli, PqC-VI, Doutor   

Tsuhako, Maria Heloísa, PqC-IV, Doutor

Jorge, Soraia, PqC-I, Doutor

Mello, Isabel, PqC-III, Mestre



Objetivo Geral da Unidade:

O Laboratório de Imunologia Viral foi criado em 1985 e desde então tem desenvolvido projetos de pesquisa e desenvolvimento, respectivamente nas áreas de mecanismos de resistência as infecções virais e tecnologia de cultura de células animais para a produção de antígenos virais e vacinas. Temos estudado os mecanismos de resistência envolvidos em infecções pelo vírus da hepatite murina, vírus da hepatite C, vírus da raiva e vírus da imunodeficiência humana e contribuído com o desenvolvimento de vacinas virais em culturas celulares, estabelecendo culturas celulares em alta densidade sobre microcarregadores. Formamos vários mestres e doutores (23) que desenvolveram no Laboratório de Imunologia Viral seus trabalhos de tese. Desde 1985, nós temos publicado vários estudos científicos e técnicos (~60) em revistas de ampla divulgação, organizado vários cursos e reuniões locais e internacionais (6 cursos ICRO-UNESCO) e implementado várias cooperações científicas internacionais através convênios do CNPq, CAPES, FAPESP e outros.

Linhas de Pesquisa Atuais:

Expressão de genes heterólogos em células de dípteros: biologia molecular e engenharia de processos (projeto temático FAPESP 02/0482-3)

O objetivo geral do projeto é a clonagem dos genes da glicoproteína G do vírus da raiva, do antígeno de superfície do vírus da hepatite B e dos antígenos do papilomavirus em vetores de expressão, para a construção de células de dípteros (S2 - Drosophila melanogaster ) estavelmente transformadas que expressem estes genes de forma constitutiva e indutível e a optimização do bioprocesso de produção em culturas celulares. Esta será feita através de avaliação de propriedades antigênicas dos antígenos, optimização de meio de cultura, desenvolvimento de metodologia de purificação do produto, seleção de bioprocesso de cultura celular em bioreator e elaboração de modelo matemático. Desta forma, com íntima associação de áreas da biologia, engenharia e matemática pretendemos propor de forma original, viável e completa um protocolo para produção de antígenos virais.

Estudo de mecanismos de resistência à infecção pelo vírus da hepatite murina 3. Replicação viral em macrófagos ativados por Interferon Gama.

O objetivo geral deste projeto de pesquisa é o estudo das bases moleculares da restrição parcial da multiplicação dos vírus da hepatite murina (MHV) em macrófagos ativados pelo interferon gama (IFN g ), fenômeno este que está envolvido na resistência dos camundongos à infecção com MHV. Usando metodologias já estabelecidas pretendemos investigar: 1. Ativação autócrina dos macrófagos com IL12 e IL18 e inibição da replicação viral via síntese de IFN g . 2. Modulação da replicação viral em macrófagos por derivados do metabolismo da arginina (oxido nítrico e arginase) e com ativadores e/ou inibidores de poliaminas . 3. Capacidade de ligação dos MHV à proteínas de membrana de macrófagos de camundongos A/J e BALB/c ativados por IFN g .

Estudo de mecanismos de resistência à infecção pelo vírus da hepatite murina 3. Papel do oxido nítrico e do interferon gama.

O vírus da hepatite murina MHV-3 é responsável por um padrão de doença característicamente dependente da linhagem de camundongos. As linhagens A/J e BALB/c constituem, respectivamente, modelos-animais de resistência e susceptibilidade a essa cepa viral. Muitas pesquisas têm focalizado os aspectos mecanísticos da hepatite viral fulminante, e um papel central para o óxido nítrico e para o IFN g tem sido sugerido. Todavia, o mecanismo microbicida dependente da produção de NO permanece discutível. Segundo alguns autores, o próprio NO atua como agente microbicida. Já outros, enfatizam a importância de oxidantes derivados do NO, como o peroxinitrito. Recentemente, a importância da oxidação de nitrito mediado por mieloperoxidase/peróxido de hidrogênio vem sendo enfatizada na literatura. Portanto, objetivamos contribuir para a elucidação dos mecanismos microbicidas acompanhando a formação de NO e de seus derivados oxidante in vivo diretamente por EPR.

Envolvimento potencial de células dendriticas na reinfecção pelo vírus da hepatite C de tecidos hepáticos transplantados

Nossa hipótese de trabalho é que as funções das células dendríticas (DC) estão alteradas em pacientes infectados com o vírus da hepatite C (VHC) após um transplante de fígado e que estas alterações podem estar correlacionadas com a severidade das lesões no tecido hepático. Assim, o objetivo do projeto é estudar as funções das células dendríticas de pacientes transplantados por doença relacionada a infecção por HCV. Modificações potenciais de suas funções serão correlacionadas com o curso de infecção recorrente por HCV. Da mesma forma é nosso objetivo estudar sob o ponto de vista epidemiológico molecular (espécies e quase espécies de HCV) os isolados de HCV destes pacientes e correlacioná-los com a progressão da infecção e das funções das células dendríticas.

Efeito da hemolinfa e suas frações em culturas celulares

O sistema baculovírus-células de inseto tem sido intensamente utilizada para a produção de proteínas recombinantes e bioinseticidas. Vários trabalhos tem sido realizados visando optimizar o sistema e aumentar o rendimento celular e viral. No entanto estes sistemas podem ser muito onerosos. Uma das formas de diminuir o custo destes meios é buscar elementos substitutos a alguns componentes do meio ou desenhar estratégias de alimentação seletiva de nutrientes que permitam obter altas densidades celulares com menor custo e menor complexidade de operação. O objetivo de nossos trabalhos é o de isolar, purificar e caracterizar proteínas e peptídios presentes na hemolinfa de insetos, em especial da Lonomia obliqua , com efeitos promotores do crescimento celular, proteção celular (ação antiapoptótica) e ação sobre a replicação viral, em especial no aumento da produção de proteínas recombinantes. Significativos efeitos no crescimento celular e tempo de sobrevivência celular (evitando a morte celular por apoptose) bem como a promoção da replicação viral e produção de proteínas recombinantes tem sido obtidos com a suplementação dos cultivos com hemolinfa. Também identificamos e isolamos peptídios com potente ação antiviral e antimicrobiana.

Publicações (desde 2000)

- Vassão RC, de Franco MT, Hartz D, Modolell M, Sippel AE, Pereira CA. Down-regulation of Bgp1a viral receptor by interferon gamma is related to the antiviral state and resistance to mouse hepatitis virus 3 infection. Virology 2000, 274:278-283

- Meneses-Acosta A, Mendonça RZ, Merchant H, Covarrubias L, Ramiréz OT. Compartive Characterization of Cell Death between SF9 Insect Cells and Hybridoma cultures. Biotechnology Bioengineering , 2001, 72(4): 441-457

- Hoshino-Shimizu S, Vaz de Lima LRA, Oliveira MI, Pereira CA, Moura A, Mendonça RZ. Measles serodiagnosis: production and evaluation of the IGM-measles ELISA IAL reagent. Brazilian Journal of Microbiology 2001, 32 :70-75

- Frazzati-Gallina N, Paoli RL, Mourão-Fuches RM, Jorge SAC, Pereira CA. Higher production of rabies virus in serum-free medium cell cultures on microcarriers. J. Biotechnol . 2001, 92 :67-72

- Pereira CA, Pouliquen Y, Rodas V, Massotte D, Mortensen C, Sogayar MC, Menissier-de-Murcia J. Optimized Insect Cell Culture for the production of recombinant heterologous proteins and baculovirus particles. BioTechniques 2001, 31 :1262-1268

- Mendonça RZ, Arrózio SJ, Antoniazzi MM, Ferreira Jr JMC, Pereira CA. Metabolic active-high density VERO cell cultures on microcarriers following apoptosis prevention by galactose/glutamine feeding. J. Biotechnol .2002, 97:13-22

- Maranga L, Mendonça RZ, Bengala A, Peixoto CC, Moraes RHP, Pereira CA, Carrondo MJT. Enhancement of Sf9 cell growth and longevity through supplementation of culture médium with hemolymph. Biotechnology Progress 2002, 19, 58-63

- Vassão RC, Consales CA, Sant'Anna AO, Pereira CA. Antibody responsiveness during immunization and challenge of genetically modified antibody responder mice with murine hepatitis virus 3. Immunobiology 2003, 207:1-9

- Petricevich V, Mendonça R.Z. Effect of crotalus venom on growth of measles virus. Toxicon , 2003,42:1 -11.

- Yokomizo AY, Antoniazzi MM, Galdino PL,Azambuja Jr.N, Jorge SAC, Pereira CA. Rabies Virus Production in High Vero Cell Density Cultures on Macroporous Microcarriers. Biotechnology & Bioengineering 2004, 85(5):506-515.

- Neves FO, Ho PL, Raw I, Pereira CA, Moreira C, Nascimento ALTO. Overexpression of a synthetic gene encoding human alpha interferon in Escherichia coli. Protein Expression and Purification 2004, 35:353-359

- Mendonça RZ, Oliveira MI , Vaz-de- Lima LRA, Andrade GP, Pereira CA, Hoshino-Shimizu S. Effect of Cell Culture System on the Production of Human Viral Antigens. J.Bras.Patol.Med.Lab 2004, 40:147-151

- Pereira CA, Schenberg ACG. Pós-graduação em Biotecnologia: êxitos e dificuldades de uma experiência interinstitucional. Revista Brasileira de Pós-Graduação . 2004, 1:101-110