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LABORATÓRIO DE IMUNOQUÍMICA
Chefe da Unidade:
Denise Vilarinho Tambourgi, PhD, PqC-VI
Pesquisadores da Unidade:
Fábio Carlos Magnoli, Bacharel, PqC-III
Fernanda Calheta Vieira Portaro, PhD, PqC-IV
Jorge Mário da Costa Ferreira Jr., PhD, PqC-III
Mônica Spadafora Ferreira, PhD, PqC-IV
Osvaldo Augusto Brazil Esteves Sant'Anna, PhD, PqC VI
Rute Maria Gonçalves de Andrade, PhD, PqC-IV
Objetivo Geral da Unidade:
O Laboratório de Imunoquímica desenvolve estudos com o objetivo de isolar e caracterizar componentes de venenos animais e seus respectivos modos de ação, a fim de estabelecer as bases para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas mais eficientes para os envenenamentos. Neste sentido, tem avaliado, em particular, o papel do Sistema Complemento na patogênese dos envenenamentos.
Além disto, tem analisado a resposta imune humoral e celular a antígenos bacterianos, virais e de parasitas. O laboratório tem também contribuído, a partir dos resultados de seus estudos, para a produção de antissoros com maior potencial neutralizante e vacinas mais eficazes. Esta interação tem gerado conhecimentos sobre aspectos das imunidades inata e adquirida, apresentação antigênica e imunogenicidade.
Linhas de Pesquisa Atuais:
Mecanismos moleculares envolvidos na patogênese do envenenamento por espécies de aranhas Loxosceles
A picada de aranhas do gênero Loxosceles induz a uma variedade de efeitos biológicos incluindo dermonecrose e hemólise dependente de Complemento. No Brasil, mais de 3000 casos de envenenamento por Loxosceles são registrados a cada ano, concentrados principalmente na região sul onde predominam as espécies L. intermedia e L. laeta . O Laboratório de Imunoquímica tem trabalhado no sentido de elucidar os mecanismos moleculares envolvidos na gênese das reações locais e sistêmicas induzidas pelo veneno dessas aranhas, com o objetivo de contribuir para a construção das bases científicas para terapêuticas mais eficientes para o tratamento do loxoscelismo.
Palavras chave: Loxosceles , aranhas, venenos, esfingomielinases, complemento, hemólise, dermonecrose, mecanismos moleculares, soros, genes, estrutura.
Manzoni de Almeida D , Fernandes-Pedrosa MF, Goncalves-de-Andrade RM , Marcelino JR, Higashi HG, Junqueira-de-Azevedo IL, Ho PL, van den Berg CW, Tambourgi DV . A New Anti -Loxoscelic Serum Produced Against Recombinant Sphingomyelinases D: Results of the Preclinical Trials. Am. J. Trop. Med. Hyg. ( in press ).
Fernandes-Pedrosa MF, Junqueira-de-Azevedo IL, Goncalves-de-Andrade RM , Kobashi LS, Almeida DD, Ho PL, Tambourgi DV . Transcriptome analysis of Loxosceles laeta (Araneae, Sicariidae) spider venomous gland using expressed sequence tags. BMC Genomics 1 9 ( 1 ): 279, 2008 .
van den Berg CW, Goncalves-de-Andrade RM, Magnoli FC , Tambourgi DV . Loxosceles spider venom induces the release of thrombomodulin and Endothelial Protein C Receptor: implications for the pathogenesis of intravascular coagulation as observed in loxoscelism. J Thromb Haemost. 5(5): 989-995, 2007.
Paixão-Cavalcante D , van den Berg CW, Goncalves-de-Andrade RM, Fernandes-Pedrosa MD, Okamoto CK, Tambourgi DV . Tetracycline Protects against dermonecrosis induced by Loxosceles spider venom. J Invest Dermatol. 127(6):1410-1418, 2007.
Tambourgi DV , Pedrosa MF, de Andrade RM, Billington SJ, Griffiths M, van den Berg CW. Sphingomyelinases D induce direct association of C1q to the erythrocyte membrane causing complement mediated autologous haemolysis. Mol Immunol. 44 (4): 576-82, 2007.
Paixao-Cavalcante D , van den Berg CW, de Freitas Fernandes-Pedrosa M, Goncalves de Andrade RM , Tambourgi DV . Role of matrix metalloproteinases in HaCaT keratinocytes apoptosis induced by Loxosceles venom sphingomyelinase D. J Invest Dermatol., 126 (1):61-68, 2006.
Andrade S A, Murakami MT, Cavalcante DP , Arni RK, Tambourgi DV . Kinetic and mechanistic characterization of the Sphingomyelinases D from Loxosceles intermedia spider venom. Toxicon, 47(4):380-386, 2006.
Murakami MT, Fernandes-Pedrosa MF, de Andrade SA , Gabdoulkhakov A, Betzel C, Tambourgi DV , Arni RK. Structural insights into the catalytic mechanism of sphingomyelinases and evolutionary relationship to glycerophosphodiester phosphodiesterases. Biochem. Biophys. Research Commun., 342 (1): 323329, 2006.
Tambourgi DV, Paixão-Cavalcante D, Gonçalves de Andrade RM, Fernandes Pedrosa MF., Magnoli FC , Morgan BP and van den Berg CW. Loxosceles Sphingomyelinase induces Complement dependent dermonecrosis, neutrophil infiltration and endogenous gelatinase expression. J. Invest. Dermatol. 124(4):725-731, 2005.
de Oliveira KC, Goncalves de Andrade RM , Piazza RM, Ferreira JM Jr , van den Berg CW and Tambourgi DV . Variations in Loxosceles spider venom composition and toxicity contribute to the severity of envenomation. Toxicon, 45(4): 421-9, 2005.
Murakami MT, Fernandes-Pedrosa MF, Tambourgi DV and Arni RK. Structural basis for metal-ion coordination and the catalytic mechanism of sphingomyelinases D. J Biol Chem. 280(14): 13658-13664, 2005.
de Andrade SA, Pedrosa MF, Gonçalves-de-Andrade RM , Vilela Oliva ML, van den Berg CW and Tambourgi DV . Conformational changes of Loxosceles venom sphingomyelinases monitored by circular dichroism. Biochem Biophys Res Commun., 327(1): 117-123, 2005.
Tambourgi DV, Fernandes-Pedrosa M de F, van den Berg CW, Gonçalves-de-Andrade RM, Ferracini M, Paixão-Cavalcante D, Morgan BP and Rushmere NK. Molecular cloning, expression, function and immunoreactivities of members of a gene family of sphingomyelinases from Loxosceles venom glands. Molecular Immunol., 41: 831840, 2004.
van Meeteren LA, Frederiks F, Giepmans BN, Fernandes-Pedrosa M de F, Billington SJ, Jost BH, Tambourgi DV, Moolenaar WH. Spider and bacterial sphingomyelinases D target cellular lysophosphatidic acid receptors by hydrolyzing lysophosphatidylcholine. J. Biol Chem. 279(12): 10833-10836, 2004.
Tambourgi DV, Silva MS da, Billington SJ, Gonçalves-de-Andrade RM , Magnoli FC , Songer JG., van den Berg CW. Mechanism of induction of complement susceptibility of erythrocytes by spider and bacterial sphyngomyelinases. Immunology, 107(1): 93-101, 2002.
van den Berg CW, Gonçalves-de-Andrade RM, Magnoli FC , Marchbank KJ, Tambourgi DV. Loxosceles spider venom induces metalloproteinase mediated cleavage of MCP/CD56 and MHCI and induces protection against C-mediated lysis. Immunology, 107(1): 102-110, 2002.
Fernandes-Pedrosa M de F , Azevedo ILJ, Gonçalves-de-Andrade RM , van den Berg CW, Ramos CR, Ho, PL, Tambourgi DV. Molecular cloning and expression of a functional dermonecrotic and haemolytic factor from Loxosceles laeta venom. Biochem. Biophys. Res. Commun., 298(5): 638-645, 2002.
Tambourgi DV, Morgan BP, Magnoli FC, Gonçalves-de-Andrade RM , van den Berg CW. Loxosceles intermedia spider envenomation induces cleavage of glycophorins from the cell surface of human erythrocytes facilitating complement mediated lysis. Blood, 95(2): 683-691, 2000.
Aspectos bio-ecológicos de espécies sinantrópicas e silvestres de Loxosceles e de outras aranhas de importância médica
Em adição ao entendimento dos mecanismos envolvidos no envenenamento por Loxosceles , o Laboratório de Imunoquímica tem investigado a distribuição das espécies sinantrópicas e silvestres de Loxosceles , bem como estudado seus aspectos bio-ecológicos e identificado caracteres morfológicos, etológicos e moleculares que constituirão base para estudos taxonômicos e evolutivos das espécies do gênero. O veneno das espécies silvestres tem sido também caracterizado para se verificar qual o risco em caso de acidentes em humanos. A influência da alimentação na composição do veneno e na biologia da aranha marrom são aspectos importantes que têm sido por nós avaliados com o objetivo de otimizar a criação de aranhas, que se destinam também, ao fornecimento de veneno para os projetos do Laboratório. Estes estudos também têm sido aplicados para outros artrópodes de interesse médico como aranhas dos gêneros Phoneutria e Latrodectus e escorpiões do gênero Tityus e larvas de Lepidoptera, Apesar da importância médica como causadores de acidentes em seres humanos, a sistemática e biologia e evolução desses artrópodes é pouco analisada. O objetivo dos trabalhos é revisar a taxonomia e identificar as relações filogenéticas entre os táxons, com base em ontogenia, morfologia e marcadores moleculares. Aspectos da biologia também são de interesse, principalmente os relacionados à utilização de recursos, hábitat, comportamento defensivo e reprodução. Resultados desses estudos têm propiciado ações de difusão do conhecimento por meio de produção de material informativo, mini-cursos e oficinas para públicos diversos, que pretendem subsidiar ações de prevenção de acidentes com esses animais, a partir do trinômio: conhecer, prevenir e evitar.
Palavras chave: Loxosceles , Phoneutria , Latrodectus , Tityus , aranha marrom, Lepidoptera, sistemática, análise cladística, distribuição geográfica, venenos, aracnídeo, aranha, escorpião, reprodução.
Gonçalves-de-Andrade RM, Pretel FD , Tambourgi DV. The Spider Loxosceles adelaida GERSTCH, 1967 (Araneae, Sicariidae) in the karstic area of Ribeira Valley , PETAR, Sao Paulo , Brazil . J. Entomol. 4 (1): 46-50, 2007.
Pretel F, Goncalves-de-Andrade RM, Magnoli FC , da Silva ME, Ferreira JM Jr , van den Berg CW and Tambourgi DV . Analysis of the toxic potential of venom from Loxosceles adelaida , a Brazilian brown spider from karstic areas. Toxicon, 45(4): 449-58, 2005.
Gonçalves-de-Andrade RM . & Tambourgi DV . First record on Loxosceles laeta (Nicolet, 1849) (Araneae, Sicariidae) in the West Zone of São Paulo City, São Paulo , Brazil , and considerations regarding its geographic distribution. Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, 36(3): 425-426, 2003.
Gonçalves-de-Andrade RM, Galati EAB, Tambourgi DV . Presença de Loxosceles similis Moenkhaus, 1898 (Araneae, Sicariidae) na Serra da Bodoquena, Estado de Mato Grosso do Sul, Brasil. Rev. Soc. Bras. Med. Trop., 34(3): 275-277, 2001.
Gonçalves-de-Andrade RM, Lourenço WR, Tambourgi DV. Comparison of the fertility between Loxosceles intermedia and Loxosceles laeta spiders. The Journal of Arachnology, 28(2): 245-247, 2000.
Caracterização imunoquímica e funcional das toxinas de venenos animais
Os danos causados por animais venenosos são comuns na maior parte do mundo. A severidade dos quadros nosológicos varia desde lesões locais superficiais a lesões bastantes severas seguidas por efeitos sistêmicos graves que podem evoluir para o óbito. No Brasil são reportados, a cada ano, grande número de casos de envenenamento por animais peçonhentos e devido à falta de entendimento sobre o mecanismo de ação de alguns venenos, o tratamento, às vezes, não está disponível. A caracterização bioquímica e funcional dos componentes ativos dos venenos auxiliará o desenvolvimento de terapias mais adequadas. Os venenos animais podem exercer seu efeito detrimental através de apenas um componente, tal como os venenos ricos em neurotoxinas ou esfingomielinases ou pela combinação de fatores que, geralmente, incluem fosfolipases, neurotoxinas, cardiotoxinas e enzimas proteolíticas capazes de atuar sobre uma variedade de tecidos e componentes do plasma. O objetivo destes estudos é isolar componentes e caracterizar os mecanismos moleculares da ação das toxinas de venenos animais.
Palavras chave: venenos, animais peçonhentos, complemento, toxinas, mecanismos de ação, soros
Silva CA, Ianzer DA, Portaro FC , Konno K, Faria M, Fernandes BL, Camargo AC. Characterization of urinary metabolites from four synthetic bradykinin potentiating peptides (BPPs) in mice. Toxicon. 2008 ( in press ).
Ricci-Silva ME, Valente RV , León LR, Tambourgi DV , Ramos OHP, Perales J, Chudzinski-Tavassi AM. Immunochemical and proteomic technologies as tools for unravelling toxins involved in envenoming by accidental contact with Lonomia obliqua caterpillars. Toxicon. 51(6): 1017-1028, 2008.
Rioli V, Prezoto B., Konno K, Melo, R, Klitze, C, Lopes-Ferreira M, Ferro ES, Camargo ACM, Portaro FCV . A novel bradykinin potentiating peptide isolated from Bothrops jararacussu venom using catallytically inactive. The FEBS Journal, 275: 442-2454, 2008.
Silva CA, Portaro FC , Fernandes BL, Ianzer DA, Guerreiro JR, Gomes CL, Konno K, Serrano SM, Nascimento N, Camargo AC. Tissue distribution in mice of BPP 10c, a potent proline-rich anti-hypertensive peptide of Bothrops jararaca . Toxicon. 51 ( 4 ): 515-523 , 2008
de Oliveira JS , Zaharenko AJ, de Freitas JC, Konno K, de Andrade SA , Portaro FC , Richardson M, Sant' A nna OA, Tambourgi DV . Caissarolysin I (Bcs I), a new hemolytic toxin from the Brazilian sea anemone Bunodosoma caissarum : Purification and biological characterization. Biochim Biophys Acta. Biochim Biophys Acta, 1760(3):453-461, 2006.
Rocha MM, Paixao-Cavalcante D, Tambourgi DV , Furtado M de F. Duvernoy's gland secretion of Philodryas olfersii and Philodryas patagoniensis (Colubridae): neutralization of local and systemic effects by commercial bothropic antivenom ( Bothrops genus). Toxicon, 47(1):95-103, 2006.
Stephano MA, Guidolin R, Higashi HG, Tambourgi DV and Sant'Anna OA . The improvement of the therapeutic anti- Lachesis muta serum production in horses. Toxicon, 45(4): 467-73, 2005.
Jared C, Antoniazzi MM, Navas CA, Katchburian E, Freymuller E, Tambourgi DV and Rodrigues MT. Head, co-ossification, phragmosis and defence in the casque-headed tree-frog Corythomantis greeningi . J. Zool. Lond., 265: 1-8, 2005.
Mattos RL, Antoniazzi MM, Haddad CFB, Tambourgi DV , Rodrigues MT and Jared C. The inguinal macroglands of the frog Physalaemus nattereri (Leptodactylidae): structure, venom, and their relation with deimatic behaviour. J. Zool. Lond., 266: 385-394, 2005.
Ramos AT, Gonçalves LR, Ribeiro OG, Rocha Campos AC, Sant'Anna OA . Effects of Lonomia obliqua (Lepidoptera, Saturniidae) toxin on clotting, inflammatory and antibody responsiveness in genetically selected lines of mice. Toxicon, 1: 43 (7):761-8, 2004.
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Sant'Anna OA , Almeida-Santos SM, Antoniazzi MM, Jared C. Predation by the opossum Didelphis marsupialis on the on the Rattlesnake Crotalus durissus . Current Herpetology, 19: 1-9, 2000.
Petricevich VL , Teixeira CF, Tambourgi DV, Gutiérrez JM. Increments in serum cytokine and nitric oxide levels in mice injected with Bothrops asper and Bothrops jararaca snake venoms. Toxicon, 38(9): 1253-1266, 2000.
Farsky SHP, Gonçalves LRC, Gutiérrez JM, Correa AP, Rucavado A, Gasque P and Tambourgi DV. Bothrops asper venom and its metalloproteinase BaP-1 activate complement system. Role in leukocyte recruitment. Mediators of Inflammation, 9: 213-221, 2000.
Resistência adquirida a infecções. Estudos sobre a imunogenicidade de venenos e toxinas animais, de vacinas virais e bacterianas. Genética da tolerância e imunossupressão
Em seus aspectos mais abrangentes, persistem várias lacunas quanto ao entendimento das relações entre patógenos e hospedeiros, bem como sobre a resposta imune a antígenos virais, bacterianos e de parasitas. Assim, o Laboratório de Imunoquímica realiza estudos como: aspectos bioquímicos e estudo da influência da hsp65 de Mycobacterium leprae íntegra e seus derivados peptídicos em processos autoimunes, estudo da aplicabilidade da sílica, as OSCMS Ordered Sílicas with Cagelike Mesoporous Structures , como adjuvante, estudo do efeito supressor de uma proteína do veneno da serpente Lachesis muta , estudos sobre as ações de toxinas virais e bacterianas em linhagens celulares definidas, e sobre células do sistema imune inato e/ou adaptativo. Há o desenvolvimento de modelos experimentais a vacinas dirigidas a patógenos como Vírus Rábico e Hepatite B , entre outros. Há interação com vários laboratórios como os de Imunogenética, Fisiopatologia, Biologia Celular, Raiva, Hepatite, Biotério Central, Processamento de Plasmas Hiperimunes, Parasitologia.
Palavras chave: Imunogenicidade, anticorpos, vacinas, imunossupressão, toxinas, antígenos.
Publicações:
Marengo EB , de Moraes LV , Faria M , Fernandes BL , Carvalho LV , Tambourgi DV , Rizzo LV , Portaro FC , Camargo AC , Sant'anna OA . Administration of M. leprae Hsp65 interferes with the murine lupus progression. PLoS ONE. 21, 3(8):e3025, 2008 .
de Freitas JG, de Souza Prudente MF, Spadafora-Ferreira M , Junqueira-Kipnis AP, de Paula EC, Tambourgi DV , de Souza Lino-Júnior R, Carvalhaes MS. Lagochilascaris minor : Experimental infection of C57BL/6 and BALB/c isogenic mice reveals the presence of adult worms. Exp Parasitol. 119 ( 3 ): 325-31, 2008.
do Nascimento CA, Leal AL, Souza TS, de Moraes CT, Comone P, Tenório EC, Vedovello D, Quinzani RH, Gilio AE, Vieira SE, Durigon EL, Botosso VF, Sant'Anna OA . One-step reverse transcriptase polymerase chain reaction for the diagnosis of respiratory syncytial virus in children. J Virol Methods. 148 ( 1-2 ): 115-119, 2008
Marón LB, Covas CP, da Silveira NP, Pohlmann A, Martins O, Tatsuo LN, Sant'Anna OAB , Moro AM, Takata CS, de Araujo OS and da Costa MHB. LUVs Recovered with Chitosan: A New Preparation for Vaccine Delivery. Journal of Liposome Research, 17: 155-163, 2007.
Ganiko, L.; Puccia, R.; Mariano, V.S.; Sant'Anna, OA ; Freymuller, E.; Roque-Barreira, M.C.; Travassos, L.R. 1: Paracoccin, an N-acetyl-glucosamine-binding lectin of Paracoccidioides brasiliensis , is involved in fungal growth. Microbes and Infection, 9(6):695-703, 2007.
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Outras Publicações do Laboratório :
Kerkis I, Ambrosio CE, Kerkis A, Martins DS, Zucconi E, Fonseca SA, Cabral RM, Maranduba CM, Gaiad TP, Morini AC, Vieira NM, Brolio MP, Sant'anna OA , Miglino MA, Zatz M. Early transplantation of human immature dental pulp stem cells from baby teeth to golden retriever muscular dystrophy (GRMD) dogs: local or systemic? J Transl Med. 6 ( 1 ): 35, 2008 .
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